ag尊龙凯时提供的人卵巢癌细胞A2780培养说明书，详细阐述了细胞培养的各项流程和注意事项，以确保用户能够高效安全地进行细胞实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：人卵巢癌细胞A2780

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640+10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

传代方式：建议首次1:2传代，通常每两天更换培养基

备注：请使用无菌离心管收集瓶中培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，请直接购买ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精消毒细胞瓶，放入超净台中严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。若未提供照片，将默认为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未达到80%汇合度的情况下，将完全培养液收集至离心管中，留5mL完全培养基，将其放入37℃、5% CO2孵箱中培养；如细胞密度已超80%，则可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙、无镁PBS洗涤1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2mL至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速进行后续操作。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15mL离心管中，1000 RPM离心5分钟并弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8mL/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖瓶底80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1mL的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后立即加入5mL完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，再将悬液转移至离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1mL的无血清冻存液（如：雅吉生物，货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，至无冰晶存在后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5mL完全培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞并接种至T25培养瓶，继续在37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能不易附着，在运输过程中可能会脱落，属于正常现象。请将所有培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟，利用沉淀再进行培养。操作应尽量轻柔，以确保细胞的活性和状态。传代后按1:2比例进行分瓶，浸泡于37℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

ag尊龙凯时对细胞出现问题的处理条款如下：

1. 如在运输过程中细胞出现丢失、破损或培养液严重泄漏等情况，将提供重发服务。
2. 若收到细胞后48小时内发生污染，需提供真实实验结果以便核实，合格后即可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时内若多数细胞未存活，需提供清晰的细胞状态照片方可重发。
4. 如在上述情形中发现污染，需遵循售后标准协议予以处理。
5. 若用户在收到产品7天内未进行有效的细胞活力检测，而造成的细胞活性问题，将不可重发。

通过使用ag尊龙凯时的产品，我们致力于为您提供精确、优化的细胞培养体验。请根据上述步骤和指南进行操作，以确保实验的成功。对于细胞培养相关的需求，欢迎随时与ag尊龙凯时联系咨询。