一、简介

BCA（双香基乙酸）法是一种广泛应用于生物医疗领域的蛋白质定量检测方法。其基本原理是通过蛋白质与铜离子在碱性条件下发生络合反应，生成稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线进行比较，可以准确测定待测蛋白的浓度。该方法具备高灵敏度、高准确度、操作简便和良好的抗干扰能力等优点，因此在生物化学分析及相关生物医疗研究中得到了广泛应用。

二、实验步骤

1.试剂准备

（1）BCA工作液：将BCA试剂A和B按照50:1的比例混合，充分摇匀后备用。 （2）标准蛋白溶液：取适量的标准蛋白，使用PBS或去离子水将其溶解，并调整浓度至1mg/mL的标准蛋白溶液。

2.蛋白样品制备

（1）细胞裂解：对细胞样品进行离心，去除上清液，添加适量的细胞裂解液，并在冰上裂解30分钟，以实现细胞的充分裂解。 （2）去除杂质：对裂解后的样品再次离心，除去沉淀，保留上清液。向上清液中加入适量的SDS，使终浓度达到0.1%，充分混匀。 （3）标准曲线制备：将适量标准蛋白溶液与相应量的SDS混合，浓度同样调整为0.1%，然后稀释成不同浓度的标准蛋白溶液。使用96孔板，分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，每个浓度设置三个重复孔。在每个孔中加入BCA工作液，摇匀后，按照说明书要求，在特定波长下测量吸光度值，以绘制标准曲线。

3.蛋白定量检测

（1）取适量待测蛋白样品，加入适量的SDS至终浓度0.1%，混匀后按照标准曲线的制备方法，加入BCA工作液，测量其吸光度值。 （2）根据之前绘制的标准曲线，查找待测蛋白样品的浓度。如果样品浓度较高，可进行适当稀释后再进行测定。

三、注意事项

1. BCA工作液应储存于4℃并避光保存，避免反复冻融。 2. 实验过程中需要保持样品与标准蛋白溶液的pH值一致，以确保结果的准确性。 3. 应尽量避免交叉污染，以免影响实验结果。 4. 对于某些特殊的蛋白质样品，可能需要采用其他方法进行定量检测，使其适应更多场景的需求，尤其是在生物医疗行业中。

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